1. 預(yù)期用途

參考試劑由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準(zhǔn)化專(zhuān)家委員會(huì)于 2019 年設(shè)立，是世界衛(wèi)生組織 (WHO) 第一個(gè)用于慢病毒載體 (LV) 整合位點(diǎn)分析的國(guó)際參考試劑 (RR)。編碼安瓿（NIBSC 代碼 18/144）包含從人體細(xì)胞中提取的冷凍干燥、純化的基因組 DNA。該材料由外部實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，顯示適合作為 LV 整合位點(diǎn)分析的定性參考試劑，對(duì)十個(gè)定義的 LV 整合位點(diǎn)有信心檢測(cè)（表 1）。此參考試劑不得用于任何其他目的。數(shù)據(jù)分析必須集中在慢病毒載體整合上。

2. 注意

NIBSC 18/144 慢病毒載體整合位點(diǎn)(標(biāo)準(zhǔn)品) 不適用于人類(lèi)食物鏈中的人類(lèi)或動(dòng)物。

該制劑含有人類(lèi)來(lái)源的材料，最終產(chǎn)品或從中提取的原材料都經(jīng)過(guò)測(cè)試，發(fā)現(xiàn) HBsAg、抗 HIV 和 HCV RNA 呈陰性。與所有生物來(lái)源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對(duì)健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗(yàn)室的安全程序使用和丟棄它。此類(lèi)安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開(kāi)安瓿或小瓶時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷。

3. 單元

參比試劑在一項(xiàng)涉及來(lái)自 13 個(gè)國(guó)家的 31 個(gè)實(shí)驗(yàn)室的國(guó)際合作研究中進(jìn)行了測(cè)試。從最一致的結(jié)果中獲得了一致的十個(gè) LV 整合位點(diǎn)。并非所有的集成站點(diǎn)都必須被報(bào)告。集成站點(diǎn)的數(shù)量是作為信息的參考值提供的，而不是作為正式分配的單位

4。內(nèi)容 

生物材料原產(chǎn)國(guó)：英國(guó)。

參考試劑含有大約 5 µg 從人類(lèi)細(xì)胞系中提取的冷凍干燥和純化的基因組 DNA。使用“鹽析"方法提取基因組 DNA，并在冷凍干燥前用 5mg/mL 海藻糖在 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋。

5. 存儲(chǔ)

將所有未開(kāi)封的凍干材料安瓿存放在 -20°C 或以下。

請(qǐng)注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會(huì)在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料。

6. 開(kāi)瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個(gè)“易開(kāi)"的彩色應(yīng)力點(diǎn)，其中狹窄的安瓿桿與較寬的安瓿瓶身相連。各種類(lèi)型的安瓿破碎機(jī)可商購(gòu)獲得。要打開(kāi)安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說(shuō)明進(jìn)行操作。

7. 材料的使用

NIBSC 18/144 慢病毒載體整合位點(diǎn)(標(biāo)準(zhǔn)品)  在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱(chēng)量?jī)龈刹牧系娜魏尾糠?/span>

a。如上文第 6 節(jié)所述打開(kāi)安瓿瓶。

b。在室溫下重構(gòu)凍干材料，例如無(wú)核酸酶水。

C。讓材料在室溫下重構(gòu) 1 小時(shí)，然后吸管充分混合。

d。使用移液器將樣品轉(zhuǎn)移到無(wú)核酸酶管中，確保收集到最大可用體積。

e.重組后，例如200µL/安瓿，無(wú)核酸酶水，根據(jù) QuBit 在含有 5mg/mL 海藻糖的 Tris-EDTA 緩沖液（10mM tris，1mMEDTA）中的定量，材料的 gDNA 濃度約為 25ng/µL。不必?fù)?dān)心材料中可能出現(xiàn)的白色斑點(diǎn)。

F。能夠檢測(cè)十個(gè)定義的 LV 集成站點(diǎn)，以驗(yàn)證最終用戶(hù)的 LV 集成站點(diǎn)分析研究協(xié)議。