NIBSC 16/250基因組KRAS密碼子1213突變標(biāo)準(zhǔn)
簡要描述:NIBSC 16/250基因組KRAS密碼子1213突變標(biāo)準(zhǔn)旨在用作校準(zhǔn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、試劑盒和測定的主要標(biāo)準(zhǔn)。這些材料不用作運(yùn)行控制。
所屬分類:NIBSC標(biāo)準(zhǔn)品
更新時(shí)間:2022-04-18
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
品牌 | NIBSC | 貨號(hào) | NIBSC 16/250 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
1. 預(yù)期用途
該面板包括八個(gè)單獨(dú)編碼的安瓿,每個(gè)安瓿都含有從人類細(xì)胞系中提取的冷凍干燥、純化的基因組 DNA (gDNA)。該面板包括七種材料,每種材料具有不同的 KRAS 密碼子 12 或 13 基因型、共有突變百分比和共有突變體以及每個(gè)二倍體人類基因組質(zhì)量的總 KRAS 拷貝數(shù)。此外,該組包含七個(gè) KRAS 密碼子 12 和 13 基因型中的每一個(gè)的 gDNA 純合野生型材料(材料代碼 16/266)。攜帶感興趣的 KRAS 突變的材料可以通過應(yīng)用特定于每種材料的計(jì)算來稀釋,以產(chǎn)生一系列 KRAS 共有突變百分比的標(biāo)準(zhǔn)。該面板旨在用作校準(zhǔn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、試劑盒和測定的主要標(biāo)準(zhǔn)。這些材料不用作運(yùn)行控制。
NIBSC 16/250基因組KRAS密碼子1213突變標(biāo)準(zhǔn) 由外部實(shí)驗(yàn)室測試,并顯示適合作為下一代測序 (NGS)、Sanger 測序、實(shí)時(shí) PCR、焦磷酸測序、數(shù)字 PCR (dPCR)、基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間 (MALDI- TOF) 質(zhì)譜分析 (MassARRAY®)、KRAS StripAssay®、高分辨率熔解分析 (HRM)、擴(kuò)增難治突變系統(tǒng) PCR (ARMS-PCR)、PCR-反向序列特異性寡核苷酸探針技術(shù) (PCR-rSSO)、微測序和限制片段長度多態(tài)性分析(RFLP)。該小組由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會(huì)于 2017 年成立,作為 WHO 第一個(gè)基因組 KRAS 密碼子 12 和 13 突變國際參考小組,NIBSC 代碼 16/2501.這些材料不得用于任何其他用途。數(shù)據(jù)分析必須專注于 KRAS。不得嘗試識(shí)別源材料捐助者。
2. 注意
該制劑不適用于人類食物鏈中的人類或動(dòng)物
對(duì)用于制備該組的細(xì)胞系進(jìn)行了測試,通過 PCR 發(fā)現(xiàn) HIV1、HTLV1、HBV 和 HCV 呈陰性。在小組的制備中使用了一種 Epstein Barr 病毒 (EBV) 轉(zhuǎn)化的類淋巴母細(xì)胞系。 EBV 是英國危險(xiǎn)病原體咨詢委員會(huì)分類的第 2 類病原體。 EBV 序列可能存在于這些材料中,但 DNA 是使用蛋白質(zhì)變性和去除的方案制備的,因此可能使病毒失活。
但是,不能消除活病毒存活的可能性。與所有生物來源的材料一樣,這種制劑應(yīng)被視為對(duì)健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗(yàn)室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎,以免割傷。
3. 單元
該小組在一項(xiàng)涉及 56 個(gè)實(shí)驗(yàn)室和 68 種測試方法的國際合作研究中進(jìn)行了測試?;蛐秃凸沧R(shí)八種材料中每種材料的突變百分比均來自最一致的方法 NGS 和 dPCR(表 1)。最終用戶能夠使用基于突變體和總的稀釋公式進(jìn)一步稀釋突變體材料(使用野生型 KRAS 密碼子 12 和 13 材料 16/266,或另一種校準(zhǔn)到材料 16/266 的野生型基因組 DNA) KRAS 拷貝數(shù),為了在可以實(shí)現(xiàn)測定校準(zhǔn)的較低共有突變百分比范圍內(nèi)達(dá)到進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn),請(qǐng)參見下面的第 7 節(jié)
4. 內(nèi)容
生物材料原產(chǎn)國:英國。
該組包含八個(gè)單獨(dú)編碼的安瓿,每個(gè)安瓿含有大約 5 µg 從人類細(xì)胞系中提取的凍干純化基因組 DNA(材料 16/266 為 25 µg)。使用“鹽析"方法提取基因組 DNA,并在冷凍干燥前用 5mg/ml 海藻糖在 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋。
5. 存儲(chǔ)
NIBSC 16/250基因組KRAS密碼子1213突變標(biāo)準(zhǔn) 將所有未開封的凍干材料安瓿存放在 -20°C 或以下。
請(qǐng)注意:由于凍干材料固有的穩(wěn)定性,NIBSC 可以在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料。
6. 開瓶指南
DIN 安瓿瓶有一個(gè)“易開"顏色的壓力點(diǎn),窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機(jī)可商購獲得。要打開安瓿,輕輕敲擊安瓿以收集底部(標(biāo)記)端的材料,并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進(jìn)行操作。
7. 材料的使用
在重新配制之前,不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分
a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶。
b。在室溫下用 100μl 無核酸酶水復(fù)溶凍干材料,除了材料 16/266(野生型 KRAS)應(yīng)用 200μl 無核酸酶水復(fù)溶。
C。使用移液器將每個(gè)樣品轉(zhuǎn)移到無核酸酶管中,確保收集最大可用體積。
d。讓材料在室溫下復(fù)溶 1 小時(shí),然后用移液管充分混合。
e.用 300µl 分子生物學(xué)級(jí) 1x Tris-EDTA 緩沖液(10mM Tris,1mM EDTA)進(jìn)一步稀釋僅材料 16/266(野生型 KRAS),并用移液管充分混合,使該材料的總體積為 500µl。
F。在 1x Tris-EDTA 緩沖液中,所有樣本的 DNA 濃度現(xiàn)在約為 50ng/µl。使用前確認(rèn) DNA 濃度。不必?fù)?dān)心材料中可能出現(xiàn)的白色斑點(diǎn)。
G。突變型 KRAS 材料可以與材料 16/266(野生型 KRAS)結(jié)合以產(chǎn)生任何選定突變百分比的標(biāo)準(zhǔn)品;請(qǐng)參閱附錄 I 中的詳細(xì)信息。
H。將所需的量添加到您的檢測中。材料可以進(jìn)一步稀釋(用無核酸酶水或合適的緩沖液),以達(dá)到適合您分析的 DNA 濃度。
g。應(yīng)在同一測定中分析初級(jí)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn),以將值分配給二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。