NIBSC 19/322 流感抗B標(biāo)準(zhǔn)品用于 B/Phuket/3073/2013 樣抗原的單次徑向擴(kuò)散測(cè)定。使用 B/Phuket/3073/2013 病毒的純化 HA 在綿羊 743、744、745、746、747 和 748 中制備抗血清試劑。通過(guò)用菠蘿蛋白酶處理從純化的病毒中提取 HA 抗原并通過(guò)在蔗糖梯度上沉降來(lái)純化 (Brand, CN and Skehel, JJ, Nature, New Biology, 1972, 238, 145-147。

綿羊 743、744、745、746、747 和 748 的免疫計(jì)劃如下：肌肉內(nèi)注射一劑約 100 µg 的 B/Phuket/3073/2013 病毒 HA 和弗氏佐劑 (FCA)，隨后兩周之后使用 20 微克劑量的弗氏不佐劑 (FIA)。每周給予三劑 10 微克的 HA，包括 FIA。初次免疫后六周，收集血清并加入NaN3（0.05% w/v）。然后通過(guò) APHIS 批準(zhǔn)的滅活 FMDV 方法處理抗血清。將從綿羊 743、744、745、746、747 和 748 獲得的抗血清混合，然后用含有NaN3 (0.05% w/v) 的 PBS 緩沖液按 1:2.8 稀釋?zhuān)⒀b入 2ml 體積的小瓶中。

NIBSC 19/322 流感抗B標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)于 1ml 中含有 20-50 微克 HA 活性的抗原的測(cè)定，應(yīng)將大約 15-25 µl 未稀釋的試劑添加到 1ml 瓊脂糖中。根據(jù)使用的 B/Phuket/3073/2013 抗原標(biāo)準(zhǔn)或根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)驗(yàn)室條件，可能需要更改抗血清濃度。

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